Isabella var datteren til William Fitz Robert, jarlen av Gloucester og hans kone Hawise. Bestefaren Robert var en uekte sønn av Henry I. Da faren døde i 1183 ble Isaballa grevinne av Gloucester.
I 1176 hadde Henry II forlovet Isabella med sin yngste sønn John selv om de var tremenninger. Dette ble ansett som for nært blodekteskap til å gifte seg. Samtidig erklærte han at Isabella var enearving til Gloucester og gjorde hennes eldre, gifte søstre arveløse. Da William døde i 1183, ble Henry II Isabellas verge og overtok inntektene fra jarldømmet.
29. august 1189 giftet John og Isabella seg i Marlborough Castle i Wiltshire og John tok jarldømmet Gloucester i hennes navn. Erkebiskopen av Canterbury erklærte ekteskapet som ugyldig pga det nære slektskapet og satte grevskapet under interdikt, men pave Clement III ga dispensasjon for ekteskapet mot at de ikke skulle ha seksuell omgang.
John fikk flere barn utenfor ekteskap mens de var gift, men de fikk ingen sammen. Han sørget heller ikke for at hun fikk særlig mye penger til husholdningen selv om det var inntekter fra hennes arv som var grunnlaget for dere økonomi. I 1193 kan det se ut som om de ble separert og John skal ha vurdert å annullere ekteskapet for å gifte seg med Alys, datteren av Louis VII av Frankrike som hadde vært hans bror Richards forlovede.
Da Richard I døde i 1199 og John arvet tronen, fikk han ekteskapet annullert på bakgrunn av slektskapet og Isabella ble aldri dronning. John beholdt Gloucester og Isabella bestred ikke annulleringen. Hun fikk tilbake tittelen grevinne av Gloucester i 1213.
John holdt Isabella umyndiggjort og i en slags husarrest de neste 14 årene. Da han giftet seg med den svært unge Isabella av Angoulême i 1200, tvang han Isabella til å ta jenta inn i sin husholdning til han kunne konsumere ekteskapet. I 1214 solgte han formynderskapet av Isabella til jarlen av Essex som senere giftet seg med henne. Ekteparet engasjerte seg i baronenes opprør mot John i 1215.
Både ektemannen og John døde i 1216 og Isabella opplevde for første gang en grad av frihet. Hun giftet seg ytterligere en gang, men døde bare en måned etter bryllupet. Hun er gravlagt i Canterbury-katedralen.
